生物分子试验教材
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内容提要：
为了适应高等院校教育改革，新的四川大学建立了医学生物分子实验室，并将原来免疫学、生物化学和分子生物学的实验课程纳入这个实验室的教学范畴。这本教材就是在这个背景下产生的。
这本教材的内容，除包括了原有的免疫学、生物化学和分子生物学三门课程的主要实验外，还设计了一些综合性实验，其目的不仅要让学习者通过这样的实验掌握较全面的实验技能，而且要使他们能够将各学科的知识贯通起来综合运用。由于这样的实验需要连续的操作，对学习者的意志、耐力、信心也将是一个考验。希望通过这样的实验课学习，对学习者素质的提高有所帮助。 编辑推荐：
为了适应高等院校教育改革，新的四川大学建立了医学生物分子实验室，并将原来免疫学、生物化学和分子生物学的实验课程纳入这个实验室的教学范畴。这本教材就是在这个背景下产生的。
这本教材的内容，除包括了原有的免疫学、生物化学和分子生物学三门课程的主要实验外，还设计了一些综合性实验，其目的不仅要让学习者通过这样的实验掌握较全面的实验技能，而且要使他们能够将各学科的知识贯通起来综合运用。由于这样的实验需要连续的操作，对学习者的意志、耐力、信心也将是一个考验。希望通过这样的实验课学习，对学习者素质的提高有所帮助。 目录：
实验1 凝集反应
实验2 沉淀反应 实验3 免疫扩散和免疫电泳 实验4 补体结合实验 实验5 溶血实验 实验6 E玫瑰花环实验 实验7 酶联免疫吸附实验 实验8 猪脾(肝)细胞染色体工DNA的提取与测定 实验9 植物染色体工DNA的提取 实验10 细菌染色体DNA的提取 实验11 酵母RNA的提取与测定 实验12 定磷法测定核酸浓度 实验13 质粒DNA的提取 实验14 随机引物PCR测定细菌染色体DNA基因型 实验15 核酸(DNA)电泳 实验16 DNA的限制性核酸内切酶酶切分析 实验17 DNA的琼脂糖凝胶电泳 实验18 从凝胶中回收目的DNA片段 实验19 质粒DNA与目的DNA片段的连接 实验20 重组质粒DNA转化原核细胞 实验21 大肠埃希氏菌感受态细胞的制备及转化 实验22 重组克隆筛选 实验23 蛋白质的沉淀和变性反应 实验24 血清蛋白乙酸纤维素膜电泳 实验25 琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白 实验26 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白 实验27 染色法测定蛋白质浓度 实验28 Folin一酚法测定蛋白质浓度 实验29 紫外吸收法测定蛋白质浓度 实验30 SDS—PAGE测定蛋白质相对分子质量 实验31 超氧化物歧化酶的分离和纯化 实验32 超氧化物歧化酶活性染色鉴定法 实验33 血清高密度脂蛋白一胆固醇和总胆固醇的测定 实验34 去污剂及膜活性试剂对红细胞细胞膜的作用 实验35 滴定法测定维生素C的含量 实验36 细胞色素C的制备 实验37 细胞色素C含铁量的测定 实验38 碱性磷酸酶的分离、纯化和动力学 实验39 肝糖原的提取与鉴定 实验40 尿糖定性实验 专题介绍 单克隆抗体制备技术 酶免疫组化染色技术 荧光免疫组化技术 DNA序列分析 书摘：
质粒DNA的提取
【原理】 质粒DNA是细胞内独立存在的分子，为双链环状DNA，无蛋白质，主要存在于原核细胞和植物细胞。质粒DNA在细胞内游离于染色体外，不与染色体DNA发生整合，并以多拷贝形式存在。由于质粒DNA能在细胞内独立复制，不依赖细胞分裂和染色体的控制，所以在分子生物学中被广泛利用来作为携带外源DNA的载体，即利用分子克隆技术把外源DNA片段或基因重组到质粒DNA分子上，然后通过转化宿主细胞，获得带有外源基因或DNA片段的克隆(无性繁殖系)。靠着宿主细胞的快速繁殖和质粒本身在细胞内的复制，可以获得大量拷贝的克隆的外源基因或DN．A片段，还可以使外源基因在宿主细胞内表达出蛋白质。因此，根据质粒作为DNA载体的两个目的，可以将质粒载体分为两类：一是单纯用来克隆和扩增外源DNA片段或基因的质粒DNA分子，称之为克隆载体(克隆质粒)；另一类是在克隆载体的基础上，在质粒DNA分子多克隆位点上游的适当位置装有蛋白质表达调控元件(一般是启动子结构)的质粒，称之为表达载体(表达质粒)。根据表达调控元件的性质(真核或原核)，表达质粒又进一步分为真核表达质粒或原核表达质粒。 作为载体分子，在克隆中所用的质粒应当具有几个必要的条件： (1)必须具有能在细胞内复制的复制起点，才能在宿主细胞内进行自主复制； (2)必须具有可以与外源DNA连接的多种限制性核酸内切酶的单一的酶切位点，这样才能使外源DNA与载体分子被完成切割和连接，形成重组的质粒DNA分子； (3)载体分子上应当具有可进行筛选的标记片段，如抗生素抗性基因、酶基因、营养缺陷基因等； (4)质粒载体的分子不应过大，这样才能连接一定大小的外源DNA片段。 对克隆载体的要求是能够通过复制获得大量的外源DNA拷贝，因此这种载体应能在适当的宿主细胞内有更多的拷贝数；对表达载体来说，需要在多克隆插入位点的上游装备与宿主细胞相适应的启动子、前导序列、加尾信号、增强子等。有的表达载体还加有信号肽基因或融合蛋白基因片段，以利于表达检测或表达产物的提纯。 质粒DNA的提取是分子生物学的基本操作技术，是分子生物学技术的一个基础。制备质粒DNA分子有不同的目的。为了获得纯的质粒DNA，以便进行分子克隆、蛋白质表达产物的提取和纯化或者用来转染供化细胞时，需要将带有质粒的细菌进行大量培养，从中提取出较多的质粒DNA备用。 …… |