口腔生物化学（精）――华西口腔医学丛书

第六章龈沟液
在牙颈部。游离龈的上皮衬里和牙齿之间形成“V”形的龈沟。早在19世纪人们就已注意到龈沟液的存在，然而直到1958年Brill和Krasse两人对龈沟液的详细研究以后，才引起牙周学界对龈沟液的广泛兴趣。Brill和Krrasse对狗肌注荧光素，3分钟后用滤纸条在龈沟液中发现荧光素。随后Brill(1959)证实在人的龈沟内龈沟液的存在，并认为是一种漏出液(transudate)。但其他的研究者认为，龈沟液是一种炎性渗出液(exudate)，而不是漏出液。这种分歧由采集龈沟液的方法不同而造成。
第一节龈沟液的形成和定量
Br．11和Krasse最早使用荧光素的研究显示，血管内的物质可以通过血管壁、牙龈结缔组织和龈沟上皮进入龈沟，证实了龈沟液(gingival Crevicular‘fluid，GCF)来源于血清。随后的研究发现，白蛋白、内毒素、胸腺嘧啶、组胺、苯妥英、辣根过氧化酶等都能穿透龈沟内上皮，这种穿透是通过细胞间隙而不是穿过细胞膜。
牙龈血管中的细胞成分(如中性粒细胞)、蛋白成分(如免疫球蛋白)以及电解质不断地透过毛细血管壁，经过牙龈结缔组织，混合部分结缔组织成分(如纤维结合蛋白)，穿透沟内上皮细胞间隙，进入龈沟。这个过程在正常牙龈也是存在的，因为临床健康的牙龈，组织学检查仍可见炎性改变。因为龈沟液来自局部微循环和结缔组织间液，在炎症状态时，血管通透性增加，沟内上皮间隙增宽，龈沟液渗出增多，龈沟液的成分也随之发生变化。
炎症早期龈沟液的产生过程是由渗透梯度所介导的。在非常健康的牙龈，也可能有少最的龈下菌斑，菌斑中的微生物产生一定量的大分子产物，这些产物可扩散而聚集于基底膜处，从而产生持续的渗透梯度，形成GCF的流动。Pashly提出了一个既适合于正常状态，也适合于炎症状态下GCF的产生模式。这一模式提出：GCF的产生是由于液体从毛细血管渗透到牙龈组织，形成细胞间液，然后又通过牙龈组织中的淋巴管形成回流。当毛细血管的渗透大于淋巴管的回流时，液体就发生聚集，形成水肿，或者离开组织进入龈沟形成GCF。调节液体渗出与回流的因素包括：毛细血管和淋巴管内皮的渗透系数、毛细血管的流体静压和渗透E,o．因此，即使在正常情况下，由于菌斑产物引起渗透压的改变，也可形成(；CF。
(；CF的液体成分主要来自血清，其他成分则分别来自血清、邻近牙周组织及细菌。
采集到滤纸条上的龈沟液的量可由多种方法测定。浸润了龈沟液的滤纸条可经茚三酮染色，然后计算面积而获得龈沟液的量。也可以通过特殊的电子仪器Periotron检测滤纸条上龈沟液浸润区域，从而给出读数。两种方法的体外比较研究显示，检测的结果无明显差异。
龈沟液的量通常很少。十个未受刺激的龈沟其龈沟液的量在1vl之内。多数关于龈沟液的研究是采集标准量的龈沟液(5u，10 PI或20 p1)，这势必造成血清的污染而稀释龈沟液，从而影响龈沟液内组分的浓度。采用时间的标准化来代替龈沟液量的标准化，即将滤纸条放至龈沟口或内30秒或1分钟，然后做龈沟液定量及成分分析。
(一)混合或单个标本的分析
由于龈沟中GCF量很少，所以最初关于GCF的研究大多采用了将多个部位收集到的GCF混合起来进行分析的方法。但是，有关人类牙周炎自然发展过程的研究表明，牙周病的活动性有部位特异性(site specific)。故不同部位的GCF混合而成的标本会掩盖其中单个部位的疾病状况及活动性。最近的研究表明，即使为轻度龈炎患者，不同部位的(3CF。量及成分差异也较大。因此，在诊断牙周病的活动性时不宜将各个部位的G(、F?昆合分析。
(二)取样时间及重复多次取样对GCF内容物的影响
将滤纸条插入未受刺激的龈沟，收集到的GCF可能是原已积存于沟(袋)内的液体及内容物。但随着滤纸条放入沟内时间的延长或多次取样，牙龈组织就会受到刺激而引起血清渗出增多，从而导致(3CF、量的增多，即所谓(3CF、流(flOW)。因此，为了能收集到以恒定速率产生的(3CF，滤纸条插入沟内的时间应当标准化。目前，多数学者
采用的是将滤纸条放人龈沟内约30秒钟。但也有些研究者不以时间为准，而以取得所
需液体量(约0．5肚1)为准。
关于重复多次取样对GCF。量的影响，早在20世纪60年代Mann就作过研究。Mann将滤纸条插入龈沟约5分钟，连续取10次标本。结果表明：(3CF、流量随时间延长而增加。最后一次取样的平均GCF量比第一次明显增加，说明重复多次取样会刺激沟内组织，从而引起GcF量的增加。Villela等将滤纸条插入10 ITtlTI深的牙周袋内放置3分钟，并连续取5次标本。结果表明，每次取样的GCF量及胶原酶浓度无差异。Persson等的研究则表明，第一次取样的GCF量及内容物均比第二次取样者高10％。且以最初5～10秒所取得者酶活性最高。但Binder等则报道，第一次标本的GCF量最大，后几次较少，但无统计学上的差别；GCF、中碱性磷酸酶(ALP)在第一次取样中浓度最低，后几次浓度增高，但无统计学上的差别。说明ALP在局部按恒定的速率产生，并进入袋内，不受GCF量的影响。因此，应当取双份标本(加入第二份标本)，强调AIP的局部形成，以此来提高鉴别诊断的敏感性。上述各研究结果的差异，一方面可能是由于各学者所采用的收集方法不一致，如采用的是将滤纸条放人沟内，或将滤纸条放在龈沟人口处；另一方面可能由于GCF中不同成分的来源和产生模式不一样。
(三)GCF、中成分的表达方式
同其他体液成分的表达方式一样，GCF‘中生化成分的传统表达方式为浓度(即单位体积中的活性或量)。研究表明，每份标本中的总活性或总量(如采集30秒标本的总量或总活性)为生化成分的最佳表达方式。1988年，Cimasoni等指出，(3CF生化成分的表达不但要考虑GCF量的影响，而且对于溶酶体酶来说，还应当考虑多形核粒细胞(PMN)数量的影响。因此，何种表达方式为最佳，尚有待进一步研究。
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